1、1第七章 芳香胺类药物的分析v 本章重点介绍芳胺类、芳烃胺类药物中的苯本章重点介绍芳胺类、芳烃胺类药物中的苯乙胺类和芳氧丙醇胺类药物的分析方法及有关乙胺类和芳氧丙醇胺类药物的分析方法及有关药物质量控制的方法。药物质量控制的方法。 2第一节 芳胺类药物的分析v 芳胺类药物的基本结构有两类：其中一类为芳伯氨基未被芳胺类药物的基本结构有两类：其中一类为芳伯氨基未被取代，对取代，对氨基苯甲酸酯氨基苯甲酸酯类，代表药物有苯佐卡因、盐酸普鲁卡类，代表药物有苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸丁卡因等局部麻醉药物；另一类则为芳伯氨基被酰化，因和盐酸丁卡因等局部麻醉药物；另一类则为芳伯氨基被酰化，并在芳环对位有取代的
2、并在芳环对位有取代的酰胺酰胺类药物。代表药物有对乙酰氨基酚、类药物。代表药物有对乙酰氨基酚、盐酸利多卡因、盐酸布比卡因和醋氨苯砜等。盐酸利多卡因、盐酸布比卡因和醋氨苯砜等。 3v一、对氨基苯甲酸酯类药物v 主要化学性质v1. 芳伯氨基特性 显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合成Schiff碱反应；易氧化变色等。盐酸丁卡因则无此特性。v2. 水解特性 分子结构中有酯键，使其容易水解。快慢受光线、热或碱性条件的影响。除盐酸丁卡因水解产物对丁氨基苯甲酸（BABA）外，上述其余药物的水解产物主要为对氨基苯甲酸。v3. 弱碱性 除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故具有弱碱性。因此能与生物碱沉淀剂发生沉
3、淀反应；但在水溶液中不能用标准酸直接滴定，在非水溶剂中能滴定。v4. 其他特性 具有芳伯氨基或同时具有脂烃胺基侧链，其游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐均系白色结晶性粉末，具有一定的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。 4v二、酰胺类药物v 本类药物包括对乙酰氨基酚等解热镇痛药、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因等局部麻醉药及醋氨苯砜抗麻风药等。本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其共性是具有芳酰氨基。 5v 主要化学性质v1. 水解后显芳伯氨基特性 在酸性溶液中易水解为芳伯氨基化合物。利多卡因和布比卡因在酰氨基邻位存在两个甲基，由于空间位阻影响，较难水解，所以其盐的水
4、溶液比较稳定。v2. 水解产物易酯化 水解后产生醋酸，在硫酸介质中与乙醇反应，发出醋酸乙酯的香味。v3. 酚羟基的特性 对乙酰氨基酚具有酚羟基，与三氯化铁发生呈色反应，可与利多卡因和醋氨苯砜区别。v4. 弱碱性 利多卡因和布比卡因的脂烃胺侧链有叔胺氮原子，显碱性，可以成盐，与生物碱沉淀剂发生沉淀反应。其中与三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具有一定的熔点。v5. 与重金属离子发生沉淀反应 6三、鉴别试验v（一）重氮化-偶合反应v 芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化-偶合反应。生成的重氮盐均可与碱性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。v 1. 苯佐卡因和盐酸普鲁卡因的鉴别方法 取供试品，加稀盐酸，
5、加亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，生成由橙黄到猩红色沉淀。v 2. 对乙酰氨基酚的鉴别方法 取本品，加盐酸并加热，放冷，滴加亚硝酸钠试液，加碱性-萘酚试液，显红色。 7v（二）与三氯化铁反应v（三）与重金属离子反应v 1. 与铜和钴离子反应 具有芳酰胺的盐酸利多卡因，在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成紫色配位化合物，此有色物转溶入氯仿中显黄色。盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因等，在同样条件下不发生此反应。v 盐酸利多卡因，在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。v 2. 羟肟酸铁盐反应 加入浓过氧化氢溶液，缓缓加热至沸后，先被氧化成羟肟酸，再与三氯化铁作用形成配位化合物
6、羟肟酸铁，其溶液显紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色。v 3. 与汞离子反应 盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液煮沸，显黄色；对氨基苯甲酸酯类药物显红色或橙黄色，可与之区别。 8v（四）水解产物反应v1. 盐酸普鲁卡因的鉴别方法：取本品，加氢氧化钠，即生成白色沉淀；加热变为油状物，继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。v2. 苯佐卡因的鉴别方法： 取本品，加氢氧化钠，即有乙醇生成，加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。 9v（五）制备衍生物测熔点v1. 三硝基苯酚衍生物 盐酸利多卡因与三硝基苯酚反应，生成难溶于水的三硝基苯酚
7、利多卡因黄色沉淀；105干燥，熔点约为228232。盐酸布比卡因与三硝基苯酚按此法制备的衍生物，其熔点约为194。v2. 硫氰酸盐衍生物 盐酸丁卡因溶于5%醋酸溶液中，加25%硫氰酸铵溶液，即析出硫氰酸盐的白色结晶；在80干燥后，测定其熔点约为131。 10v（六）紫外特征吸收光谱v 本类药物分子结构中均具有苯环，因此具有紫外吸收光谱特征。v（七）红外吸收光谱v 该法特别适用于化学结构比较复杂、化学结构相互之间差别较小的药物的鉴别与区别。 11四、特殊杂质检查v（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查v 以对硝基氯苯为原料，水解得对硝基酚，还原得对氨基酚，再经乙酰化后制得，。在生产中除可能引入一般杂
8、质外，还可能引入特殊杂质，中国药典规定除了检查酸度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分和炽灼残渣等一般杂质外，还需检查以下项目：v 1 乙醇溶液的澄清度与颜色v 2 有关物质v 3 对氨基酚12v（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查v v 注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液pH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素的影响，可发生水解反应生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。高温加热，脱羧转化为苯氨，而苯氨又可被氧化为有色物质，使注射液变黄，疗效下降，毒性增加。v v 检查方法 1ml中含盐酸普鲁卡因2.5ml的溶液，作为供试品溶液，加乙醇制成每1ml中含30g的溶液，作为对照品溶液。硅胶薄层板
9、上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇为展开剂，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。 13五 含量测定v（一）亚硝酸钠滴定法v 具有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应，中国药典收载的苯佐卡因盐酸普鲁卡因及其片剂盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射液，醋胺苯砜及其注射液，经水解后可用本法测定其含量。14v1 原理 芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。v2 测定的主要条件v（1）加入适量的溴化钾加快反应速度v（2）加过量盐酸加速反应：重氮化反应速度加快；重氮盐
10、在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。v 若酸度过大，又可阻碍芳伯氨基的游离，反而影响重氮化反应速度。在太浓的盐酸中还可使亚硝酸分解。加入盐酸的量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为1:2.56。 15v（3）室温（1030）条件下滴定：通常温度高，重氮化反应速度快；但温度太高，可使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解。一般温度每升高10，重氮化反应速度加快2.5倍。v（4）滴定管尖端插入液面下滴定：重氮化反应为分子反应，反应速度较慢，故滴定不宜过快。为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解，滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅速加入，使其尽快反应
11、。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。尤其是近终点时，因尚未反应的芳伯氨基药物的浓度极稀，须在最后一滴加入后，搅拌1min5min。 16v 3. 指示终点的方法 有电位法、永停滴定法、外指示剂法和内指示剂法等。多采用永停滴定法或外指示剂法指示终点。v（1）永停滴定法：电极应为铂-铂电极系统。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。v（2）外指示剂法：常用碘化钾-淀粉糊剂或指示液，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘遇淀粉即显蓝色。17v（二）非水溶液滴定法v 盐酸丁卡因和盐酸利多卡因测定时，将供试品
12、溶解在冰醋酸中，以结晶紫为指示剂，用高氯酸液滴定至终点；而盐酸布比卡因测定时，则以萘酚苯甲醇为指示剂。由于药物均为盐酸盐，用高氯酸滴定时有氢卤酸生成，故在滴定前加入醋酸汞试液，使成为氯化高汞，以除去氢卤酸的干扰。v 盐酸利多卡因测定，溶液显绿色。而盐酸布比卡因测定时是以萘酚苯甲醇为指示剂，溶液亦显绿色。 18v（三）分光光度法v 对乙酰氨基酚在氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收。中国药典（2000年版）则采用百分吸收系数法，测定对乙酰氨基酚原料、片剂、注射液、栓剂及胶囊剂的含量。v 1. 对乙酰氨基酚的测定v 2. 片剂溶出度的测定v 3. 分光光度法测定人唾液中对乙酰氨基酚的含量
13、：利用对乙酰氨基酚水解产物对氨基酚与亚硝酰铁氰化钠在碱性条件下生成蓝色配位化合物。v 样品处理： 取唾液样品，加三氯醋酸，离心，加入显色剂（亚硝酰铁氰化钠），于695.6nm波长处测定吸收度。v 标准曲线制备标准曲线制备 v 回归方程： A=86.20C+0.294，r=0.9999。 19v（四）比色法（四）比色法v 本法准确、简便，适用于本法准确、简便，适用于盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因及及其制剂的常规分析。此法也适用于普鲁卡因青其制剂的常规分析。此法也适用于普鲁卡因青霉素及其注射液的测定。肾上腺素、青霉素、霉素及其注射液的测定。肾上腺素、青霉素、焦亚硫酸钠、硝酸苯汞及氯甲酚等不干扰测定。焦亚
14、硫酸钠、硝酸苯汞及氯甲酚等不干扰测定。 20v（五）（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定v 盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应，生成荧光物。v 本法也适于普鲁卡因胺制剂的测定，若测定浓度大于0.25g/ml2.5g/ml的注射液时，可用水稀释后再测定。 21v（六）高效液相色谱法v 以苯甲酸为内标同时测定普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA）v 1. 色谱条件v 色谱柱 Waters C18v 流动相 甲醇-1%醋酸（40：60，pH4.7）用时当天配制。v 检测器 紫外检测器，检测波长250nm v 盐酸普鲁卡因在0.2mg/ml0.8
15、mg/ml范围内呈线性，其平均回收率为100.11%0.56%；含PABA在16g/ml64g/ml范围内呈线性，其回收率为99.96%0.39%。也适用于溶液的稳定性。 22v（七）体内药物分析v 对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度检测分析v 对乙酰氨基酚是解热镇痛药v 色谱条件： v 1.采用Nova-Pak C18柱和Nova-Pak C18预柱v 2.流动相为甲醇-水（30：30），流速为0.8ml/minv 3.二极管阵列检测器，检测波长254nm。v 血浆样品制备 静脉血置含肝素抗凝剂的离心管中，上清液为待测血浆，加饱和硫酸锌溶液沉淀蛋白。23v 血浆中对乙酰氨基酚标准曲线的制备： 加
16、入不同浓度的对乙酰氨基酚工作液100l，使血浆中药物浓度为0.9g/ml454.5g/ml，得回归方程： v A=1.64104+1.68107C，r=0.9995v v 线性范围为0.9g/ml454.5g/ml。回收率为99.0%0.9%；精密度：日内RSD为1.20%。 24第二节第二节 苯乙胺类药物苯乙胺类药物 25 一、 主要化学性质v1. 弱碱性 本类药物为仲胺氮，故显弱碱性；其游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水。v2. 酚羟基特性 具有邻苯二酚v3. 光学活性 手性碳原子，具有旋光性26v二、鉴别试验v（一）与三氯化铁反应v 具有酚羟基，显紫色或紫红色v（二）与甲醛硫酸
17、反应v 具有醌式的有色化合物。v（三）氧化反应v 有酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾等氧化剂氧化呈现不同的颜色。肾上腺素被碘或过氧化氢氧化后生成肾上腺素红v（四）紫外吸收与红外吸收光谱v（五）与亚硝基铁氰化钠反应v 具有脂肪伯氨基，加亚硝基铁氰化钠加热后显紫红色。此为脂肪族伯胺的专属反应v（六）双缩脲反应v 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱具有氨基醇结构可显双缩脲特征反应v 取本品加硫酸铜、氢氧化钠显蓝紫色，加乙醚，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。 27v三、特殊杂质检查v（一）酮体检查v 肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺、盐酸去氧肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、和盐酸甲氧明等均检查酮体，药典规定检查酮体杂质
18、。 28v（二）有关物质的检查v 均用薄层色谱法加甲醇制成每1ml中含20mg的溶液，每1ml中含20mg的溶液，每1ml中含0.1mg的溶液，点于硅胶G薄层板上，以异丙醇-氯仿-浓氨溶液为展开剂。供试品如显杂质斑点，与对照溶液主斑点比较，不得更深。v （三）盐酸苯乙双胍的检查v 点样于色谱滤纸条29v四、 含量测定v 药物的原料多采用非水溶液滴定法和溴量法测定含量，其制剂的测量法较多，有提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、比色法、紫外分光光度法和高效液相色谱法等。30v（一）非水溶液滴定法v 冰醋酸为溶剂，加入醋酸汞液以消除氢卤酸的干扰，并用结晶紫指示液指示v 1.重酒石酸去甲肾上腺素的测定
19、 空白实验校正v 2.盐酸克仑特罗的测定 用空白校正，用电位指示液指示终点v 3.硫酸沙丁胺醇的测定 空白校正，有机碱的硫酸盐，因硫酸在滴定液中酸性很强，只能滴定至HSO4-31v（二）溴量法v 酸性溶液中酚羟基的邻对位活泼氢能与过量的溴定量的发生溴代反应再以碘量法测定剩余的溴，用硫代硫酸钠滴定，淀粉做指示液v （三）比色法v 酚羟基与亚铁离子络合显色v 测定原理 加亚硝酸钠试液后，则分子中的芳伯氨基重氮化，在酸性溶液中，与N-(1-萘基)-乙二胺偶合显色，在500nm波长处进行比色测定。 32v（四）提取酸碱滴定法v 根据本类药物的盐酸盐或硫酸盐可溶于水，而药物本身为游离碱不溶于水，可以溶于
20、有机溶剂的一般通性进行的。测定方法是将供试品溶于水或矿酸溶液中，加入适量的碱性试剂使药物游离后，用适当的有机溶剂提取。然后将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，标准酸液直接滴定；或在提取液中加过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴。 33v（五）荧光分光光度法v 邻苯二酚可被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，在一定条件下发生转位，生成具有荧光性的N-甲基-3，5，6-三羟基吲哚，可建立荧光分光光度法测定肾上腺素含量34v（六）高效液相色谱法v 具有高效分离、高灵敏度、高选择性v 应用示例一应用示例一 重酒石酸去甲肾上腺素注射液的高效液相色谱测定法v 色谱条件与系统适用性实验 十八烷
21、基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.14%-庚烷基磺酸钠溶液-甲醇为流动相；检测波长为280nm，理论塔板不底于3000v 应用示例二应用示例二 血浆中儿茶酚胺类的HPLC-EChD测定法v 以ODS型键合想为固定相，用含离子对试剂流动相进行洗脱，流出组分用电化学检测。 35v（七）衍生化气相色谱法v 酰化衍生化，酰化产物在色谱柱上分析，用氢火焰离子化检测器检测。36v第三节 芳氧丙醇胺类药物v 有芳氧丙醇胺基本骨架阻断剂氧烯洛尔和盐酸卡替洛尔v 药物的结构与理化性质v 本品为白色结晶性粉末，味苦；在乙醇或丙酮中易溶，在水中微溶。v 本品为白色粉末；在水中溶解，在甲醇中略溶，在乙醇中极微溶解，在乙醚
22、中几乎不溶；在冰醋酸中极微溶解 37v鉴别试验v（一）化学鉴别反应v 盐酸卡替洛尔加硫氢酸铬显红色沉淀v氧烯洛尔使高锰酸钾颜色消退，产生棕色沉淀v（二）紫外吸收峰特征v 盐酸卡替洛尔在215nm与252nm的波长处有最大吸收。v 氧烯洛尔乙醇溶液在275nm处有最大吸收 38v盐酸卡替洛尔中有关物质检查v v 采用薄层色谱法的高低浓度对比法v 点于硅胶GF254薄层板上，以氯仿/甲醇/浓氨溶液为展开剂，紫外光灯下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 39v 含量测定v 原料药用非水溶液滴定法，制剂可用分光光度法分析v （一）盐酸卡替洛尔原料药含量测定方法v 冰醋酸照
23、电位滴定法，用高氯酸滴定液滴定，用空白v 实验校正。v （二）盐酸卡替洛尔滴眼液含量测定方法v 在252 nm波长测吸收 40v（三）体内药物分析v 预柱为十八烷基硅填充剂氧烯洛尔及其异构体分离分析柱为手性OD-R柱；流动相：含NaClO4-乙氰的盐酸盐缓冲液；紫外检测器，检测波长273nm。v 所有样品操作过程均为在线联结。 41C4H9HNCOOCH2CH2N(CH3)2+HNO2NCOOCH2CH2N(CH3)2C4H9NO+H2O42NH2COOCH2CH2N(CH3)2+NaNO2 + 2HClN2ClCOOCH2CH2N(CH3)2+NaCl + H2ON2ClCOOCH2CH2N
24、(CH3)2OH+NCOOCH2CH2N(CH3)2HON+NaCl + H2O43HONHCOCH3+HCl + H2OHONH2.HCl+CH3COOHHONH2.HCl+HNO2HON2+Cl+2H2O44HON2+ClOH+NaOHOHOHNN+H2O + NaCl45OHNHCOOCH33+FeCl3ONHCOOCH3Fe+3HCl46NHCOCH2NCH3CH3C2H5C2H5+ Cu+2NHCOCH2NCH3CH3C2H5C2H5NH2COCHNH3CH3CC2H5C2H5Cu47NHCOCH2NCH3CH3C2H5C2H5+CoCl2NHCOCH2NCH3CH3C2H5C2H5
25、NH2COCHNH3CH3CC2H5C2H5Co48CONHCH2CH2N(C2H5)2H2N+ H2O2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2H2N+ H2OCON(OH)CH2CH2N(C2H5)2H2N3+ FeCl3CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2H2N3Fe+ 3 HCl49COOCH2CH2N(C2H5)2H2N.HClNaOHCOOCH2CH2N(C2H5)2H2NNaOHCOONaH2N+ OHCH2CH2N(C2H5)2COONaH2NHClCOOHH2NCOOHH2NHClHCl加热过量50COOC2H5H2N+NaOHCOONaH2N+ C2H5OHC2H5
26、OH + 4I2 + 6NaOHCHI3+5NaI + HCOONa + 5H2O煮沸加热51NHCOCH2N(C2H5)2H3CCH3.O2NNO2OHNO2NHCOCH3CH3NC4H9.O2NNO2OHNO252COOCH2CH2N(C2H5)2C4H9HN.HCl+NH4SCNCOOCH2CH2N(C2H5)2C4H9HN.HSCN+ NH4Cl53Na2 Fe (NO) (CN )5 + H2ONa2 Fe (CN )5H2O + NONa2 Fe (CN )5H2O +H2NOHNa2Fe(CN)5H2NOH+H2O54H2NCOOH-CO2H2NO(Z)(Z)OO55ArNHCO
27、R + H2O加热H+ArNH2 + RCOOHArNH2 + NaNO2 + 2HClArN2+Cl - + NaCl + 2H2ONaNO2 + HClHNO2 + NaClHNO2 + HClNOCl + H2OArNH2NO+Cl慢ArNHNO快ArNNOH快ArN2+ClHNO2 + HBrNOBr + H2O56返回到外指示剂法ArN2+Cl+ H2NArArNNNHAr + HCl2NaNO3 + 2KI + 4HCl2NO + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2O酸度过大酸度合适572(CH3CO)2O(CH3CO)3+ + CH3COO58NHCOCH2N(C2H
28、5)CH3CH3.HCl+Hg(Ac)NHCOCH2N(C2H5)CH3CH3.HAc+ HgCl22NHCOCH2N(C2H5)CH3CH3.HAc+ HClO4NHCOCH2N(C2H5)CH3CH3.HClO4+HAc59COOCH2CH2N(C2H5)2NH2+2OOSO3Na+ H2OCOOCH2CH2N(C2H5)2N(E)OHO(Z)+OHOHSO3Na+NaHSO460CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2+OO(Z)OOHN(Z)OCOOHCONHCH2CH2N(C2H5)261CH(OH)CH2N+H2C(CH3)3OHCH2OH2.SO42+ HClO4CH(OH)CH2N+H2C(CH3)3OHCH2OH.CH(OH)CH2N+H2C(CH3)3OHCH2OH.+ClO4HSO462HOHCOHCH2NHCH3+3 Br2HOHCOHCH2NHCH3BrBrBr+HBrBr2 + 2KI2KBr + I2I2 + 2 Na2S2O32NaI + Na2S4O663CH(OH)CH2NHC(CH3)3 N2+ClClCl+NHCH2CH2NH2CH(OH)CH2NHC(CH3)3NClClNHCH2CH2NH2N6465666768CNHOR2ORR3R1NHR4CR2O对氨基苯甲酸酯酰胺
