1、实验十一：血型鉴定及实验十一：血型鉴定及交叉配血交叉配血医学检验学院检验基础实验室医学检验学院检验基础实验室1医疗技能实验内容实验内容n一、红细胞悬液的制备n二、ABO血型鉴定（试管法）和Rh血型鉴定n三、交叉配血（盐水介质和聚凝胺介质）2医疗技能临床中：待测待测制成制成红细红细胞悬液胞悬液，待测待测3医疗技能一、红细胞悬液制备一、红细胞悬液制备n常用浓度：1%、2%、5%、10%。n方法：抗凝血 移去上层血浆待测 洗涤：剩余的红细胞中加5ML NS，混匀，洗涤 ，弃上清，此步骤重复3次，最后一次上清应清亮并全部弃去。配制悬液。（根据要求浓度）如：5%：洗涤后压积红细胞1滴+19滴NS，混匀3
2、000r/min5min3000r/min5min4医疗技能二、ABO血型鉴定：n（一）、正定型n（二）、反定型 5医疗技能二、ABO血型鉴定（盐水介质）：n一、正定型一、正定型原理：用特异性血型抗体检测被检RBC,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原，进一步判定血型。6医疗技能二、ABO血型鉴定：n一、正定型一、正定型方法：方法：1、试管法：加标准血清加标准血清1滴滴（-A -B）加红细胞悬加红细胞悬液液1滴（滴（5%）混匀，离心混匀，离心 观察结果观察结果1000r/min1min-A-B7医疗技能二、ABO血型鉴定：n正定型正定型判定结果
3、：判定结果：试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血8医疗技能二、ABO血型鉴定：n二、反定型：原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体，进一步判定血型。9医疗技能二、ABO血型鉴定：n二、反定型二、反定型方法：方法：1、试
4、管法：加待测血清加待测血清2滴滴加标准红细加标准红细胞悬液胞悬液1滴滴混匀，离心混匀，离心 观察结果（观察结果（方法同正定型方法同正定型）1000r/min1min-A-B10医疗技能11医疗技能二、ABO血型鉴定：n结果判定：结果判定：抗A抗B结果ABABOA(RBC)B(RBC)结果BAOAB正定型正定型反定型反定型12医疗技能二、ABO血型鉴定n凝集强度的判断见实验指导表格n注意：1、正反定型一致才能确定结果；2、所用器材必须清洁干净，避免溶血，专型专用；3、控制离心速度和时间，防止假阳性和假阴性；4、抗原抗体比例要适当；5、溶血时，注意结果的判定；6、正反定型结果不一致时，不可轻易判定
5、，需查明原因，可能有技术问题也可能有标本问题。13医疗技能 Rh（D）血型鉴定n原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否出现凝集判断是否有D抗原的存在。14医疗技能 Rh（D）血型鉴定加抗加抗D血清血清1滴滴加红细胞悬加红细胞悬液液1滴（滴（5%）轻轻摇动玻片混匀，轻轻摇动玻片混匀，2min内判断结果，内判断结果，有凝集（），无凝有凝集（），无凝集需按照说明书进一集需按照说明书进一步实验确认是否为阴步实验确认是否为阴性性15医疗技能 Rh（D）血型鉴定n注意事项：1、按照试剂说明书操作2、先加血清，后加RBC悬液，可通过视觉判断以免出现漏
6、加抗D试剂导致的假阴性结果3、观察结果时，应轻轻捻动试管，若用力摇动，可认为破坏弱凝集，误判为（一）性。16医疗技能三、交叉配血三、交叉配血n概念：供血者的血浆、红细胞与受血者的红细胞、血浆混合，观察有无凝集反应。n方法：盐水介质法、聚凝胺介质法、微柱凝胶法、抗人球蛋白法、酶介质法。17医疗技能交叉配血：n 主侧：受血者血浆+供血者红细胞 Ps：patient serum Dc：donor celln 次侧：供血者血浆+受血者红细胞 Ds：donor serum Pc：patient cell18医疗技能受血者受血者献血者献血者PsPcDsDc主侧主侧次侧次侧3%-5%1%19医疗技能一、盐水
7、介质法一、盐水介质法n原理原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断是否有血型不合的情况20医疗技能（一）盐水介质法（一）盐水介质法n操作：操作：1、取两只小试管，标明主和次侧2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴 次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴3、混匀，离心，1000r/min,离心1min4、观察结果：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起，观察有无凝集或溶血，如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为凝集（）；如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮起或成为均匀的
8、RBC悬液，则为不凝集（一）；若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。21医疗技能（二）聚凝胺介质法（二）聚凝胺介质法n原理：原理：聚凝胺聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体是一种高价阳离子多聚物，在液体中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝集。集。低离子液低离子液可降低可增强抗原、抗体间的吸引可降低可增强抗原、抗体间的吸引力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。离心后加入离心后加入再悬液（枸橼酸钠），再悬液（枸橼酸钠），可中和聚凝胺可中和聚凝胺的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷，的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷，使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合引起的凝集仍然存在。引起的凝集仍然存在。22医疗技能操作步骤n按照说明书进行23医疗技能 谢谢！谢谢！24医疗技能
